رفتن به محتوای اصلی

تکنیک فلوسایتومتری

تکنیک فلوسایتومتری

امروزه به کارگیری تکنولوژیهای مدرن به جهت افزایش سرعت، دقت و سهولت انجام آزمایشات، روز به روز در حال گسترش است.

تکنیک فلوسایتومتری توسط ایمونولوژیست هایی ابداع شد که تلاش میکردند جمعیت های خالص سلول ها را از یکدیگر جدا کنند و پس از تکثیر آنها در محیط کشت سلولی، نقش هر سلول را در سیستم ایمنی بررسی کنند .

فلوسایتومتری روشی دقیق و با کارایی بالاست که برای شناسایی سلول ها ( ذرات) و ارزیابی خصوصیّات آنها به کار می رود. هر سلولی بر حسب نوع و تخصصی که بر عهده دارد مولکولهای مختص به خود را بیان می کند، یعنی همه ژن ها در همه سلول ها بیان نمیشوند بلکه برحسب وظیفه ای که در طی تمایز بر عهده سلول گذاشته شده است و بر حسب محیطی که در آن قرار می گیرد، هر سلولی خود انتخاب می کند که در پاسخ به شرایط محیطی کدام ژن را فعال سازد.

بنابراین ردیابی پروتئین های سلولی حاصل از بیان ژن ها هم در سطح و هم در درون سلول می تواند وسیله ای بسیار مفید برای شناسایی سلول باشد. مولکولهای سطحی سلول ها تحت نام عمومی (CD) Cluster Differentiation شناخته می شود و برای ردیابی آنها از آنتی بادی های مونوکلونال کونژوگه با فلوروکروم استفاده می شود. برای نمونه مارکرهای سطحی سلول های پلاکت عبارتند از CD51 ,CD41 ,CD61 و آنتی بادی هایی با همین نام قادرند این مولکول ها را در سطح سلول شناسایی کنند.

سلول ها از اجزای مختلفی مثل غشاء سیتوپلاسمی، غشاء هسته ای، هسته و سیتوپلاسم تشکیل می شود و تقریبا همه مولکولهای موجود در قسمتهای مختلف سلول را می توان با استفاده از فلوسایتومتری ردیابی و تعیین مقدار کرد.

معمولاً مولکول های سطحی موجود در غشاء سیتوپلاسمی به راحتی در دسترس آنتی بادی قرار می گیرد ولی برای رسیدن آنتی بادی یا ماده فلورسانس به مولکول های درونی سلول، رو شهای مطمئن و موثری لازم است.

تکنیک فلوسایتومتری بر اساس پراکنده سازی نور توسط سلول های مورد آزمایش و انتشار فلورسانس از آنها استوار است. نشر فلورسانس با استفاده مستقیم از فلوروکرو مهای متصل شونده به اجزای سلولی یا ترکیبی از رنگ فلورسنت با آنتی بادی های مونوکلونال حاصل می شود. این آنتی بادی های کونژوگه با فلورسانس می توانند مولکول های سطحی و یا ترکیبات داخلی سلول ها را ردیابی کرده و به آنها متصل شوند و شناسایی انواع سلول های موجود در یک جمعیت سلولی متنوع را توسط فلوسایتومتری امکان پذیر می سازند.

فلوسایتومتری در دهه اخیر در آزمایشگاه های تشخیص طبی، جهت تشخیص انواع لوسمی های خونی، بیماری های نقص سیستم ایمنی )برای مثال تست DHR به روش فلوسایتومتری جهت بررسی توانایی فاگوسیتوز  نوتروفیل ها در کودکان و افراد مبتلا به بیماری های گرانولو ماتوز مزمن (در انسان به کار گرفته می شود.  همچنین در بخش های پژوهشی، برای تعیین پیش آگهی بیمار یها و ارزیابی درمان بدخیمی ها استفاده می شود.

اصول آزمایش و تهیه سلول برای فلوسایتومتری:

قدم اول بعد از تهیه نمونه، ساختن سوسپانسیون یکنواخت است. نمونه خون در حالت معمول حاوی سلو لهای منفرد است که در پلاسمای خون به صورت معلق هستند. نمونه ای به دست آمده از مغز استخوان را می توان  با پی پت کردن مکرر به صورت سوسپانسیون سلو لهای منفرد در آورد.  درنمونه بافت های جامد و لنفوئیدی، اتصالات سلول به سلول یا سلول به بستر باید شکسته شود و سلو لها کاملا آزاد شوند.. قدم دوم این است که تا زمان آنالیز نمونه، خصوصیات و عملکرد سلو لهای تحت بررسی باید در حالت طبیعی و دست نخورده حفظ شود.

پس از تهیه سوسپانسیون مناسب، سلولها باید با آنتی بادی های مونوکلونال کونژوگه نشاندار، مجاور شوند. روش نشاندار کردن تحت تاثیر فاکتورهای زیادی قرار می گیرد از جمله میزان اختصاصی بودن آنتی بادی و غلظت آنتی ژن در سطح یا داخل سلول.

محیط اطراف سلولها معمولا با pH برابر ۳/ ۷ و غلظت سلولی بین ۱۰۵ تا ۱۰۶ سلول در هر میلی لیتر تهیه می شود و تحت چنین شرایطی سلولها به صورت یک به یک از مقابل محور تابش نور لیزر عبور خواهند کرد. چنانچه واکنشی صورت گرفته باشد سطح سلول دارای خاصیت فلورسانس شده و با جذب نور لیزر برانگیخته و طول موج بلندتری بازتاب می کند. نور بازیافتی در زوایای مختلف مورد سنجش قرار می گیرد.

معمولا حجم کمی از نمونه( ۰/۲-۱ml) برای آنالیز لازم است. قطر سلولهای ارزیابی شده باید در محدوده ۱ تا ۳۰ میکرون باشد. فلوسایتومتری های معمولی که جهت آنالیز سلولهای خونی طراحی شده اند برای ارزیابی ذرات کوچک تر از ۱ میکرون حساسیت لازم را ندارند، از طرفی وجود ذرات درشت تر از ۳۰ میکرون، موجب انسداد جریان مایع در دستگاه خواهد شد.

عاملی که فلوسایتومتری را به عنوان یک تکنیک فوق العاده در مطالعات کلین کیی در می آورد این است که سرعت جریان نمونه ) ۵ تا ۵۰ متر در ثانیه(  امکان جمع آوری اطلاعات مربوط به ۵۰۰۰ تا ۵۰۰۰۰ سلول را در هر ثانیه فراهم می نماید.

 

شرکت سماتشخیص آریا ارائه دهنده ی انواع کیت ها و آنتی بادی های فلوسایتومتری از کمپانی Cytognose می باشد.

شما میتواینید برای مشاهده ی انواع محصولات فلوسایتومتری به بخش محصولات مراجعه نمایید.

 

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

برگشت به بالا