برای بهبود و بهتر شدن عملکرد شما در ایمونوهیستوشمی (IHC) راهکارهای بسیار ساده ای وجود دارد که با اندکی دقت تاثیر بسیر زیادی بر نتیجه نهایی شما دارد و می توانید لام نهایی با کیفیت تری داشته باشد که باعث تسریع درجواب دهی نمونه های پاتولوژی وایمونوهیستوشیمی شما شود. نتیجه نهایی بهتر، باعث صرفه جویی بسیار در وقت و انرژی پرسنل درگیر در این فرآیند و کاهش به سزا در هزینه ها و مصرف آنتی بادی و کیت های دیتکشن و سایر مواد مصرفی می گردد.
فیکساسیون (Fixation)
از ضربه های وارده به بافت جلوگیری کنید.
از خشک شدن نمونه جلوگیری کنید.
از آسیب های حرارتی وارده به بافت جلوگیری کنید.
از آسیب های شیمیایی وارده به بافت جلوگیری کنید.
نمونه ها را به درستی برچسب بزنید.
مرحله فیکساسیون (Fixation) باید به سرعت انجام شود.
از فیکساتیو کافی و ظرف مناسب استفاده کنید.
PH فیکساتیو را کنترل کنید
در فیکساسیون (Fixation) نمونه های بزرگ ، عجله کنید.
از تاخیرهای غیر ضروری خودداری کنید.
نمونه ها را با ملایمت جا به جا کنید.
نمونه برداری
وضعیت فیکساسیون (Fixation) را بررسی کنید.
برش های نازک آماده کنید.
از آسیب زدن به نمونه خودداری کنید.
از قلم کشیدن به روی آنتی بادی خودداری کنید.
مراقب پدهای بیوپسی باشید.
کاست های مناسب را انتخاب کنید.
از قرار دادن بیش از اندازه ی بافت داخل کاست خودداری کنید.
کاست ها را به درستی برچسب بزنید.
آبگیری
از یک برنامه زمانی مناسب استفاده کنید.
فیکساسیون (Fixation) اضافی فراهم کنید.
کیفیت آنتی بادی را حفظ کنید.
از پارافین با کیفیت بالا استفاده کنید.
آنتی بادی های خود را از کمپانی های معتبر تهیه کنید.
قالب گیری
نمونه ها را با دقت داخل قالب بگذارید.
یک قالب مناسب انتخاب کنید.
نمونه ها را با ملایمت جا به جا کنید.
از گرمای وارده بیش از حد خودداری کنید.
به طور مرتب دما را بررسی کنید.
از قرار دادن بیش از اندازه ی بافت داخل کاست خودداری کنید.
برش یا میکروتوم
از تیغه های با کیفیت بالا استفاده کنید.
زاویه تیغ میکروتوم را درست تنظیم کنید.
بلوک ها را با دقت برش دهید.
از یخ زدگی بافت ها جلوگیری کنید.
از بلوک های سرد استفاده کنید.
به آرامی برش بزنید.
آب گیری بافت
از تمیز بودن و خالص بودن آب اطمینان حاصل کنید.
مطمئن شوید که لام ها نیز تمیز هستند.
از کشیدن قلم به روی آنتی بادی خودداری کنید.
از آلوده شدن لام جلوگیری کنید.
از شناور کردن چند بلوک با هم جلوگیری کنید.
دمای آب را کنترل کنید.
از چین و چروک خوردن بافت ها جلوگیری کنید
از انبساط بیش از حد بافت ها خودداری کنید.
به بافت های شناور آسیب نرسانید.
بافت ها را با دقت انتخاب کنید.
از ایجاد حباب در زیر بافت ها جلوگیری کنید.
از بلند کردن بافت جلوگیری کنید.
خشک کردن بافت ها
قبل از خشک کردن آبکشی کنید.
دمای خشک کردن را نظارت کنید.
بافت ها را در زمان مناسب خشک کنید.
رنگ آمیزی روتین (H&E)
از زمان بندی دقیق استفاده کنید.
به طور منظم بر کیفیت کار نظارت کنید.
شرایط رنگ آمیزی را استاندارد کنید.
از پارافین زدایی کامل اطمینان حاصل کنید.
بافت ها را کاملا هیدراته کنید.
بر کیفیت هماتوکسیلین نظارت کنید.
از «آبی» شدن کامل هسته مطمئن شوید.
از رنگ آمیزی ناهموار ائوزین اجتناب کنید.
PH ائوزین را نظارت کنید.
مرحله مونت یا روکش کردن
قبل از پاکسازی و پوشاندن کاملاً آبگیری کنید.
از خشک شدن و تشکیل کریستال خودداری کنید.
رنگ آمیزی اختصاصی
نوع رنگ آمیزی را بشناسید..
از کنترل مثبت استفاده کنید.
از زمان بندی دقیق استفاده کنید.
پایداری آنتی بادی را در نظر بگیرید.
آنتی بادی ها را به درستی نگهداری کنید.
به پروتکل آنتی بادی پایبند باشید.
هر گونه تغییر در پروتکل را ثبت کنید.
مراحل شستشو را استاندارد کنید.
میکروسکوپ را با دقت تنظیم کنید.
ایمونوهیستوشیمی
از بافت های با کیفیت بالا استفاده کنید.
از فیکساسیون (Fixation) مطمئن شوید.
از چسبندگی بافت جلوگیری کنید.
پارافین زدایی و استفاده آنتی بادی را به درستی انجام دهید.
از گرادیان های غلیظ اجتناب کنید.
آنتی بادی را با دقت انتخاب کنید.
پروتکل هر آنتی بادی را به دقت بخوانید.
مرحله Antigen Retrieval را به درستی و با توجه به آنتی بادی انجام دهید.
مراقب مثبت کاذب بودن یا Cross Reaction آنتی بادی ها باشید.
مرحله Peroxidase blocking یا غیر فعال کردن آنزیم های بافت به درستی انجام دهید.
مراقب رنگ آمیزی پس زمینه باشید.
از یک Detection مناسب استفاده کنید.
مراحل شستشو را به درستی انجام دهید.
مرحله Counter-Staining را به درستی انجام دهید. ا این کار می‌توان تضاد رنگی بین محل هایی که دارای پروتئین مورد نظر و نواحی فاقد آن می‌باشند را ایجاد نمود. در این صورت شناسایی پروتئین مورد نظر به راحتی انجام می‌گیرد
از کنترل های مناسب استفاده کنید.
نتایج را به دقت ارزیابی کنید.